Der TuS Holzkirchen ist ein deutscher Fußballverein aus Holzkirchen im oberbayerischen Landkreis Miesbach. Die erste Mannschaft der Herren spielt seit der Saison 2016/17 in der sechstklassigen Landesliga Bayern Südwest.

Der Verein wurde am 1. Juli 1948 gegründet. In den 1960er Jahren spielte der TuS Holzkirchen in der damals viertklassigen Landesliga Bayern Süd. Nach mehreren Abstiegen in den 1970er und 1980er Jahren gelang dem Verein 2016 die Rückkehr in die Landesliga.

Zu den größten Erfolgen des TuS Holzkirchen zählen der Gewinn des Oberbayerischen Pokals in den Jahren 1963 und 1966 sowie die Teilnahme am DFB-Pokal in der Saison 1963/64. Im DFB-Pokal unterlag der TuS Holzkirchen in der ersten Runde dem Bundesligisten 1. FC Nürnberg mit 0:3.

Heimspielstätte des TuS Holzkirchen ist das Sportzentrum Holzkirchen. Das Stadion bietet Platz für 2.500 Zuschauer.